Cy5-伯胺 [ Cyanine 5 amine ]

Cy5 (Cyanine 5) 是一种发远红(far-red)荧光的花青素荧光染料。它的消光系数很高，荧光很亮，并且对pH不敏感，一般可以用633 nm或647 nm的激光束激发然后用 Cy5或APC滤片观察，所以在绝大部分荧光仪器上都可以使用。Cy5荧光落在远红光区，使用Cy5或者其它远红光染料的一个重要优势是在这个长波长光谱范围内样品背景荧光较低，而在这个区域CCD相机/检测器检测灵敏度最高。Cy5可以用来标记蛋白，抗体，多肽，核酸分子，纳米粒等。

伯胺基(primary amine)是生物标记反应中常用的基团。蛋白表面赖氨酸侧链(residue)官能团就是伯氨基，伯胺基可以和NHS活化酯(N-羟基琥珀酰亚胺酯，N-hydroxysuccinimide ester，succinimidyl ester),异氰酸酯(-N=C=S，isothiocyanate)或其它活化基团反应生成稳定链接，从而把Cy5分子连接到目标分子上。

Cy5-伯胺的水溶性较低，所以在水相的标记反应体系内需要使用有机共溶剂，常用有机溶剂包括DMF，DMSO和乙腈等。如需标记的分子对有机溶剂敏感，可选择磺化花青素（sulfonated cyanine），即磺化-Cy5-伯胺( D10029 )。两者的光谱性质几乎一致，因此大部分应用可相互替换。两者的主要区别在于：磺化染料是水溶性的，在水相的标记反应体系内不需要使用有机共溶剂，并且降低染料在水中聚集的可能性，增强标记效率( 了解更多··· )。

Cy5-伯胺标记后的产物Ex/Em是640/664nm。和它具有相似荧光特性的染料包括Alexa Fluor 647，DyLight 649，ATTO 647等。

注意事项

• Cy5-伯胺水溶性较低，标记反应可在有机溶剂中进行或者含有机助溶剂的水相中进行。
• 标记时使用不含氨基的缓冲体系，比如磷酸钠缓冲液（PBS），Hepes缓冲液，碳酸氢钠缓冲液；或硼酸缓冲液等。不要使用任何含伯胺或仲胺的缓冲液，比如Tris，甘氨酸等，它们会和Cy5上的伯胺竞争。高浓度咪唑(imidazole)也会影响反应。
• 标记反应不要放在强光下，因为大部分荧光化合物在强光下长时间照射会缓慢光漂泊(photobleaching)。

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