Cy7.5-NHS 活化酯 [ Cyanine 7.5 NHS ester ]

产品号 :D10015
外观 :绿色固体
CAS号 :1469278-04-3
分子式 :C49H52ClN3O4
分子量 :782.41
ex/em :788/808 nm (PBS缓冲液)
消光系数(ε) :223000 L⋅mol−1⋅cm−1
量子产率(Φ) :
溶解性 :可溶于DMF等有机溶剂
保存条件 :避光,干燥,-20oC保存
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D10015-25 Cy7.5-NHS 活化酯 25mg ¥
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产品描述

Cy7.5 (Cyanine 7.5) 是一种发近红外(NIR)荧光的花青素荧光染料。Cy7.5的荧光波长很长,发射峰(Em max)大于800nm,恰好处于肌体组织近红外窗口 I 的区域(肌体的血液,体液和组织此区域背景荧光弱,而长波长穿透性强),所以Cy7.5的标记物常应用于小动物活体体内成像中。Cy7.5可以用来标记蛋白,抗体,多肽等。另外,由于近红外荧光背景低,Cy7.5标记的二抗常常用于荧光蛋白免疫印迹(Western Blot)。

本产品Cy7荧光基(fluorophore)是优化后的结构,多次甲基(polymethine)桥链经环己烯固化,荧光量子产率提高了20%,从而使荧光更亮。

NHS活化酯 (N-羟基琥珀酰亚胺酯,N-hydroxysuccinimide ester,succinimidyl ester)是生物标记反应中最常用的活化基团。它活化Cy7.5分子中的羧基,让它可以和目标生物分子上的胺基(伯胺或者仲胺)反应生成稳定的酰胺键,从而把Cy7.5分子标记到生物大分子上。由于游离胺基是蛋白,抗体,多肽表面的常见官能团(来自于赖胺酸侧链),Cy7.5-NHS可以和它们直接反应。核酸分子中天然不带游离胺基,只有胺基修饰过的RNA或者DNA才可以和Cy7.5-NHS反应。

Cy7.5-NHS活化酯的水溶性较低,所以在水相的标记反应体系内需要使用有机共溶剂,常用有机溶剂包括DMF,DMSO和乙腈等。如需标记的分子对有机溶剂敏感,可选择磺化花青素(sulfonated cyanine),即sulfo-Cy7.5-NHS活化酯。两者的光谱性质几乎一致,因此大部分应用可相互替换。两者的主要区别在于:磺化染料是水溶性的,在水相的标记反应体系内不需要使用有机共溶剂,并且降低染料在水中聚集的可能性,增强标记效率。

Cy7.5-NHS标记后的产物Ex/Em是788/808nm。和它具有相似荧光特性的染料包括Alexa Fluor 790,DyLight 800,吲哚菁绿(indocyanine green, ICG)等。

注意事项

  • NHS ester基团对湿度比较敏感,务必干燥保存产品。使用前产品需放到室温回温至少20分钟。
  • 使用不含氨基的缓冲体系。比如磷酸钠缓冲液(PBS),Hepes缓冲液,碳酸氢钠缓冲液,或硼酸缓冲液等。不要使用任何含伯胺或仲胺的缓冲液,比如Tris,甘氨酸等。高浓度咪唑(imidazole)也会影响反应。
  • 标记反应不要放在强光下,因为大部分荧光化合物在强光下长时间照射会缓慢光漂泊。

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