AF555 炔烃 [ Alexa Fluor 555 alkyne ]

AF555，即Alexa Flour 555，是Alexa Fluor家族中的一种橘黄色-橙红色荧光染料，是Sulfo-Cy3的类似物，常用于代替Cy3、TAMRA染料使用。AF555染料的激发谱和发射谱具有较好的对称性，并且都有非常典型的肩峰，激发谱的肩峰巧合处于532nm激光束附近，在共聚焦实验中常常被用于激发AF555染料。AF555染料的激发峰和发射峰谱带恰好处于黄色光与红色光过度区域，因此，激发光往往呈黄色或者黄绿色，发射出来的荧光为黄红色（橙红色），这种荧光色彩和AF488的绿色荧光一样，都是人肉眼非常敏感的彩色光，在荧光显微镜下很容易辨认出来。

AF555染料的极性很大，水溶性极强，荧光亮度和荧光稳定性也极好，是蛋白/抗体标记的良好染料。从化学结构上看，AF555的母核是花青素Cy3，但是母核上带有多达4个磺酸根基团，相对于二磺酸的sulfo-Cy3，足足多了一倍。 AF555染料的四磺酸结构让其具有极度亲水性，染料标记到蛋白表面后，不会改变蛋白表面极性，降低了蛋白疏水化聚集沉淀的风险；磺酸根带有多电荷，这让蛋白表面标记的多个AF555分子间互相电荷排斥，极大降低了染料局部靠近而荧光淬灭的概率，因此AF555标记后的蛋白往往发出更强的荧光，亮度比sulfo-Cy3标记的样品要强20%以上。

炔烃(alkyne)是常用生物标记基团。通过铜催化点击化学反应(Copper-catalyzed azide–alkyne cycloaddition, CuAAC)，炔烃可以和叠氮(azide)生成稳定的生物链接(bioconjugate)。点击化学反应效率很高，可在水相中(也可有机相)快速完成，即便在低浓度(μM)下。点击化学反应技术发展很成熟，各种相关试剂商业可得，各种生物标记应用广泛。