AF647 马来酰亚胺 [ Alexa Fluor 647 maleimide ]

AF647（Alexa Fluor 647）是Alexa Fluor染料家族中一种发远红（far-red）荧光的染料，是最常用的一种AF染料之一，在重要实验中，常常被用于替代Cy5染料。AF647的极性大，水溶性极好，荧光稳定性能也不错，能耐受较长时间照射，特别适应于标记蛋白质，是二抗标记的常规荧光染料。尽管AF647的量子产率不算高，但是其消光系数非常高（即表现为颜色深，分子吸收光子能力强），所以AF647的荧光亮度很高，另外，由于远红光区样品背景弱，而CCD相机对该区光子检测都较灵敏，所以各种因素加成之下，让AF647成为最灵敏的荧光染料之一，常常可检测出丰度非常低的样品。AF647的ex/em和Cy5非常接近，因此在常规荧光显微镜时可使用Cy5滤片组；在共聚焦显微成像时，633nm激光束可以良好的激发该染料，594nm激光也可以通过该染料的肩峰激发，很好的适配了生物实验室常规平台激光器，包括常规共聚焦显微镜、流式细胞仪和荧光扫描仪等。

马来酰亚胺(maleimide)是生物标记反应中常用的基团，它可以和巯基(-SH)通过亲和加成反应生成稳定的巯醚(thioester)结构从而实现标记。尽管胺基(比如赖氨酸精氨酸侧链)也有亲和性，但在中性或微酸性缓冲液中，马来酰亚胺选择性标记巯基(反应速度比胺基快>1000倍)。标记反应反应迅速，选择性高，产率好，另外，巯基是一种在生物分子中广泛存在的官能团，比如蛋白中的半胱氨酸(cysteine)和双硫键等，因此马来酰亚胺/巯基(maleimide/thiol)标记已成为仅次于NHS/胺基标记的最常用生物连接反应(bioconjugation)。